Summary: Selepas makmal memperoleh garisan sel baharu, garisan sel mesti dikultur dan dikembangkan terlebih dahulu dan kemudian dibekukan. Pengawetan krio sel boleh digunakan sebagai sandaran apabila sel hilang akibat pencemaran dan keadaan lain.......
Selepas makmal memperoleh garisan sel baharu, garisan sel mesti dikultur dan dikembangkan terlebih dahulu dan kemudian dibekukan. Pengawetan krio sel boleh digunakan sebagai sandaran apabila sel hilang akibat pencemaran dan keadaan lain. Di samping itu, hampir semua sel mengalami tahap variasi tertentu semasa proses budaya dan laluan. Untuk mengekalkan ketekalan keputusan eksperimen, secara amnya sel tidak boleh dikultur selama berpuluh-puluh generasi. Jika ia digunakan semula, adalah perlu untuk mencairkan dan menkultur sel-sel yang dipelihara, kurang dilalui sebelum digunakan.
Terdapat empat perkara utama dalam proses pembekuan sel: penuaian sel, penggunaan agen pelindung, kadar pembekuan dan persekitaran penyimpanan.
Penuaian sel
Sel-sel yang digunakan untuk cryopreservation biasanya dipilih apabila sel-sel tersebut adalah kira-kira 90% konfluen. Pada masa ini, pertumbuhan sel adalah baik dan bilangan sel adalah besar, dan medium kultur perlu ditukar 24 jam sebelum menuai sel. Kaedah penuaian sel untuk cryopreservation adalah sama seperti biasa. Sentrifuge pada 100xg selama 5 minit untuk mengumpul sel dan menggantungnya semula. Sel hidup dikira. Cairkan atau pekatkan kepada dua kali ganda kepekatan sel terakhir untuk pemeliharaan sel (biasanya 4-10 juta sel/ml), tambahkan isipadu yang sama bagi larutan campuran agen pelindung medium kultur yang telah disediakan, dan gaulkan perlahan-lahan, dan aliquot ke Tiub kriopreservasi, pengawetan krio.
Penggunaan agen pelindung.
Dalam cryopreservation sel, DMSO biasanya digunakan sebagai agen pelindung. Dalam cryopreservation sel, kepekatan akhir DMSO yang digunakan secara amnya adalah 5-15%. Kepekatan DMSO dalam larutan cryopreservation sel tertentu boleh didapati daripada ATCC. Untuk sel yang sangat sensitif, terutamanya sel hibridoma, mungkin lebih baik menggunakan 95% serum dan 5% DMSO semasa pengawetan krio. Apabila menggunakan agen pelindung, gunakan medium kultur atau serum untuk membuat dua kali ganda kepekatan akhir, dan kemudian campurkan dengan jumlah medium kultur sel ampaian yang sama. Kadar pembekuan sel
Kadar pembekuan sel paling baik dikawal untuk memberi masa yang mencukupi untuk sel-sel itu dehidrasi tanpa rosak oleh dehidrasi yang berlebihan. Bagi kebanyakan sel, penurunan suhu 1 hingga 3°C seminit adalah sesuai. Operasi biasa ialah meletakkan sel pada suhu -20°C selama 1-2 jam, kemudian masukkannya ke dalam peti sejuk -80°C semalaman (jika tiada peti sejuk -80°C, anda boleh menggunakan ais kering sebaliknya), dan kemudian pindahkan ke tangki nitrogen cecair atau di bawah -130 Simpanan jangka panjang dalam peti sejuk pada ℃.
Persekitaran storan
Suhu penyimpanan jangka panjang sel ialah -130 ℃ atau lebih rendah. Suhu lapisan gas dalam tangki nitrogen cecair adalah antara -140 ℃ dan -180 ℃. Sel boleh disimpan dalam lapisan gas atau direndam dalam nitrogen cecair. Jika boleh, sebaiknya simpan dalam lapisan gas, kerana ia boleh mengelakkan nitrogen cecair daripada memasuki simpanan beku. Tiub menyebabkan letupan apabila sel dikeluarkan (tetapi dengan cara ini, hanya sejumlah kecil nitrogen cecair boleh disimpan dalam tangki nitrogen cecair, yang perlu ditambah dengan kerap). Sel-sel juga boleh disimpan di dalam peti sejuk pada -80 ℃ selama beberapa bulan atau lebih.
英语
阿拉伯语
���ļ���