Bagaimana untuk membersihkan dan menjana semula lajur selepas pencemaran?

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2021-11-25 16:42:09 Thursday

Summary: Apabila lajur kromatografi tercemar, tingkah laku kromatografinya akan agak berbeza daripada lajur yang tidak tercemar. Lajur yang tercemar boleh menyebabkan masalah tekanan belakang. Lajur fasa terbalik yang tercemar mesti dibersihkan dan dijana......

Apabila lajur kromatografi tercemar, tingkah laku kromatografinya akan agak berbeza daripada lajur yang tidak tercemar. Lajur yang tercemar boleh menyebabkan masalah tekanan belakang. Lajur fasa terbalik yang tercemar mesti dibersihkan dan dijana semula untuk memulihkan keadaan operasi asal.
Kunci untuk menjana semula lajur HPLC yang tercemar ialah mengetahui sifat bahan cemar dan mencari pelarut yang sesuai untuk mengeluarkannya. Jika pencemaran disebabkan oleh pengumpulan bahan tertahan kuat semasa suntikan berulang, langkah mudah untuk membuang bahan cemar ini selalunya boleh memulihkan tingkah laku kromatografi. Kadangkala, selepas banyak operasi, lajur kromatografi dibasuh dengan 90-100% pelarut B (pelarut yang lebih kuat dalam sistem fasa terbalik dua pelarut) untuk 20 isipadu untuk menghapuskan bahan cemar. Contohnya, pelarut bukan akueus seperti metanol, asetonitril, dan tetrahidrofuran boleh digunakan untuk baki lipid dalam lajur.

Secara umumnya, semua kaedah pembersihan mempunyai bentuk yang serupa. Pelarut yang digunakan meningkat dengan kekuatan pelarut. Selalunya pelarut terakhir adalah sangat hidrofobik (seperti etil asetat atau hidrokarbon) dan boleh digunakan untuk melarutkan bahan bukan kutub seperti lipid dan minyak. Kita mesti memastikan bahawa setiap pelarut dalam satu siri pelarut boleh dicampur dengan pelarut seterusnya.
Pada akhir proses pembersihan, adalah perlu untuk kembali ke sistem pelarut asal dengan bantuan pelarut larut larut berkekuatan sederhana. Sebagai contoh, isopropanol ialah pelarut yang sangat baik sebagai langkah perantaraan kerana ia boleh dicampur dengan n-heksana atau diklorometana dan juga dengan pelarut fasa air. Walau bagaimanapun, kelikatan isopropanol adalah sangat tinggi, dan kadar alir yang rendah mesti dipastikan untuk mengelakkan tekanan pam yang berlebihan. Apabila mengepam lajur kromatografi, cecair pembilasan disambungkan terus ke botol sisa dari hujung alur keluar lajur kromatografi, dan tidak boleh mengalir melalui sel pengesanan untuk mengelakkan pencemaran sel pengesanan.
Lajur kromatografi fasa terbalik tidak menggunakan larutan penimbal, sila gunakan siri pelarut berikut untuk menjana semula:
100% metanol → 100% asetonitril → 75% asetonitril-25% isopropanol → 100% isopropanol → 100% metilena klorida → 100% n-heksana → 100% metilena klorida → 100% metilena klorida → 100% cetonitrile a.
Lajur kromatografi fasa terbalik menggunakan larutan penimbal, sila gunakan siri pelarut berikut untuk menjana semula:
air → asetonitril → kloroform (atau isopropanol) → asetonitril → air.