Soalan Kultur Sel Lazim Dijawab

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2022-07-14 16:15:00 Thursday

Summary: 1. Jika saya menerima botol sel beku, bolehkah saya menyimpannya dalam nitrogen cecair secara terus? Dalam kebanyakan kes, sel yang dihantar pada ais kering (-80°C) boleh dikembalikan kepada nitrogen cecair dan kemudian dicairkan dengan cepat......

1. Jika saya menerima botol sel beku, bolehkah saya menyimpannya dalam nitrogen cecair secara terus?
Dalam kebanyakan kes, sel yang dihantar pada ais kering (-80°C) boleh dikembalikan kepada nitrogen cecair dan kemudian dicairkan dengan cepat. Walau bagaimanapun, rawatan sedemikian boleh mengurangkan daya maju sel. Bagi sesetengah talian sel yang sensitif, ini mungkin menyukarkan pemulihan sel. Fenomena ini dianggap disebabkan oleh perubahan dalam struktur hablur ais intraselular akibat perubahan suhu. Oleh itu, adalah disyorkan bahawa sel harus dicairkan dan dikultur secepat mungkin selepas penerimaan. Adalah lebih baik untuk mengurangkan masa penyimpanan pada -80°C, sebaik-baiknya suhu ini hanya digunakan untuk penghantaran.

2. Mengapakah sel perlu disimpan dalam fasa gas dan bukannya fasa cecair dalam tangki nitrogen cecair?
Sel disimpan dalam fasa nitrogen cecair untuk pemulihan yang lebih mudah. Dalam fasa cecair nitrogen cecair, jika cryovial tidak dimeteraikan dengan betul atau bocor, sel-sel berada dalam hubungan langsung dengan nitrogen cecair, yang akan menjejaskan daya maju sel selepas pencairan.

3. Bagaimana untuk menukar medium untuk sel ampaian?
Sel dalam ampaian boleh dibesarkan dengan hanya menambah medium segar (jika ruang membenarkan) atau dengan mengasingkan sel daripada medium lama dengan sentrifugasi (100 x g selama 5 min), diikuti dengan mengagantung semula sel yang telah dipeli dalam medium segar. Walau bagaimanapun, untuk kebanyakan saluran sel penggantungan, hanya menambah medium adalah pendekatan yang lebih baik. Mana-mana kaedah memerlukan medium disegarkan sebelum sel mencapai ketumpatan tepu maksimumnya. Ketumpatan tepu sel adalah antara 3 x 10 5 dan 2 x 10 6 bergantung pada garis sel dan keadaan kultur (rehat atau gelisah, tahap pengoksigenan, dsb.).

Sel mesti dicairkan untuk menurunkan kepekatan sel untuk membolehkan pemulihan nutrien yang mencukupi untuk mengekalkan sel dalam pertumbuhan logaritma. Jika medium hanya ditukar tanpa mengurangkan ketumpatan sel, sel akan cepat menghabiskan medium dan mati. Jika sel dicairkan di bawah ketumpatan minimumnya, mereka akan memasuki fasa ketinggalan, tumbuh sangat perlahan, atau mati. Setiap talian sel penggantungan mempunyai ketumpatan tepu dan selang laluan yang berbeza, jadi kiraan sel harian ialah cara terbaik untuk memantau talian sel penggantungan.